شناسایی بیوشیمیایی و ایمنوهیستوشیمی MMP-7

نوع فایل : word

تعداد صفحات : 16

تعداد کلمات : 5300

مجله : Journal of Dentistry

انتشار : 2018

ترجمه ی متون جدول : ترجمه شده است

درج جداول در فایل ترجمه : درج شده است

منابع داخل متن : به صورت فارسی درج شده است

کیفیت ترجمه : طلایی

فونت ترجمه : ب نازنین 12

تاریخ انتشار
20 آگوست 2020
دسته بندی
تعداد بازدیدها
1589 بازدید
30,000 تومان

عنوان فارسی مقاله:شناسایی بیوشیمیایی و ایمنوهیستوشیمی MMP-7 در عاج دندان انسان

چکیده

اهداف: ماتریکس متالوپروتئیناز (MMPs)، آنزیم‌های درونزای دندانی هستند که ادعا می‌شود نقش مهمی در تجزیه و تخریب ماتریکس آلی عاج دارند. هدف این مطالعه، بررسی حضور، مکان و توزیع MMP-7 در عاج سالم انسان بود.

 روش‌ها: عاج دندان در بافر ایزوالکتریک فوکوسینگ پودر، دمینرالیزه و حل شد. پروتئین‌های حل شده به غشاهای نیتروسلولز برای تحلیل‌های وسترن بلاتینگ (WB) انتقال یافتند. برای تحلیل زیموگرافیک، نمونه‌های پروتئین عاج در الکتروفورز ژل سولفات-پلی اکریلامید دودسیل سدیم ۱۲ درصد حاوی ژلاتین برچسب گذاری شده فلورسانت تحت الکتروفورز قرار گرفت. به علاوه، غلظت‌های MMP های عاجی با استفاده از ایمنواسی میکروسفر فلورسنت با کیت مولتی پلکس MMP-MAP انسانی اندازه گیری شد. تکنیک برچسب گذاری ایمنی قبل و پس از جایگذاری برای بررسی مکان یابی و توزیع MMP-7 در عاج استفاده شد. عاج با استفاده از انجماد شکسته شد، قطعات به طور جزئی کلسیم زدایی شده و با آنتی MMP-7 مونوکلونال اصلی برچسب گذاری شده و آنتی بادی ثانویه با نانوذرات طلا کانژوگه شد. برچسب گذاری‌های MMP-7 در ماتریکس عاج دمینرالیزه به صورت ذرات طلای با پراکندگی الکترونی بالا شناسایی شدند(شناسایی بیوشیمیایی و ایمنوهیستوشیمی).

 نتایج: WB و تحلیل زیموگرافیک پروتئین‌های عاج استخراج شده، MMP7(20-28 کیلودالتون) را نشان داد. به علاوه، MMP-7 در سوپرناتانت های پرتوهای دندانی انکوبات شده با استفاده از ایمنواسی میکروسفر فلورسانت مشاهده شد. تحلیل FEI-SEM و TEM، MMP-7 را به عنوان اجزای تشکیل دهنده‌ی ماتریکس آلی عاج دندان ایجاد کرد.

 نتیجه گیری: این مطالعه نشان داد که MMP-7 جزء درون زای شبکه‌ی فیبریلار عاج انسان است.

 اهمیت بالینی: درک فرایندهای اصلی ریمادلینگ و تجزیه‌ی ماتریکس عاجی به منظور توسعه‌ی پروتکل‌های بالینی بهینه و تضمین افزایش طول عمر عاجی، مهم است.

ادامه مطلب

راهنمای خرید:
  • لینک دانلود فایل بلافاصله بعد از پرداخت وجه به نمایش در خواهد آمد.
  • همچنین لینک دانلود به ایمیل شما ارسال خواهد شد به همین دلیل ایمیل خود را به دقت وارد نمایید.
  • ممکن است ایمیل ارسالی به پوشه اسپم یا Bulk ایمیل شما ارسال شده باشد.
  • در صورتی که به هر دلیلی موفق به دانلود فایل مورد نظر نشدید با ما تماس بگیرید.

Title: Biochemical and immunohistochemical identification of MMP-7 in human dentin

Abstract

 Objectives: Matrix metalloproteinases (MMPs) are dentinal endogenous enzymes claimed to have a vital role in dentin organic matrix breakdown. The aim of the study was to investigate presence, localization and distribution of MMP-7 in sound human dentin. Methods: Dentin was powdered, demineralized and dissolved in isoelectric focusing buffer. Resolved proteins were transferred to nitrocellulose membranes for western blotting (WB) analyses. For the zymographic analysis, aliquots of dentin protein were electrophoresed in 12% sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis containing fluorescently labeled gelatin. Further, the concentrations of dentinal MMPs were measured using Fluorescent Microsphere Immunoassay with a human MMP-MAP multiplex kit. Pre- and post-embedding immunolabeling technique was used to investigate the localization and distribution of MMP-7 in dentin. Dentin was cryo-fractured, the fragments partially decalcified and labeled with a primary monoclonal anti-MMP-7 and a secondary antibody conjugated with gold nanoparticles. MMP-7 labelings were identified in the demineralized dentin matrix as highly electron-dense dispersed gold particles. Results: WB and zymographic analysis of extracted dentin proteins showed presence of MMP-7 (∼20–28 KDa). Further, MMP-7 was found in the supernatants of the incubated dentin beams using Fluorescent Microsphere Immunoassay. FEI-SEM and TEM analyses established MMP-7 as an intrinsic constituent of the human dentin organic matrix. Conclusion: This study demonstrated that MMP-7 is an endogenous component of the human dentin fibrillar network.  Clinical significance: It is pivotal to understand the underlying processes behind dentin matrix remodeling and degradation in order to develop the most optimal clinical protocols and ensure the longevity of dental restorations.

 

    دیدگاهتان را بنویسید